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λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用

更新時(shí)間:2018-12-11      瀏覽次數(shù):1801

λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用

上海信帆生物公司的λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒,操作簡(jiǎn)單,價(jià)格實(shí)惠,資料穩(wěn)定。是簡(jiǎn)便的λ噬菌體基因組DNA的試劑盒,其提取原理是通過(guò)PEG沉淀、酚異戊醇等提取,殘留碎片通過(guò)沉淀離心去除,通過(guò)一系列快速的漂洗、離心步驟,將鹽、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除。

獲得λ噬菌體基因組DNA,可進(jìn)行酶切、PCR等下游實(shí)驗(yàn),獲得DNA的量很高,但是純度一般,但是足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

噬菌體載體廣泛用于文庫(kù)篩選,目的克隆培養(yǎng)獲得大量的噬菌體顆粒需要提取λ噬菌體DNA來(lái)開(kāi)展測(cè)序等后續(xù)工作。λ噬菌體裂解培養(yǎng)物離心后的上清,首先用RNaseA/DNaseⅠ混合酶消化去除殘留的宿主菌DNA/RNA,沉淀收集噬菌體。

λ噬菌體基因組DNA提取試劑盒如何正確使用

1、用于裂解的噬菌體、宿主菌越新鮮,裂解越好、收獲量越大。

2、液體培養(yǎng)裂解時(shí),到了時(shí)間裂解還沒(méi)發(fā)生,可適當(dāng)?shù)奶岣邷囟然蚣哟笳駬u速度。

3、RNase/DNase消化過(guò)度,可能減少產(chǎn)量;消化不*,可粘走部分噬菌體。

4、噬菌體裂解液在低溫下易結(jié)晶析出白色物質(zhì),可37℃溫浴至*溶解。

λ噬菌體是長(zhǎng)尾噬菌體科的一種溫和噬菌體。λ噬菌體是雙鏈DNA噬菌體,有直徑55nm的二十面體頭部,末端有細(xì)長(zhǎng)尾絲的非收縮尾。DNA是線性分子,有黏性末端即單鏈延伸12個(gè)核苷酸,故感染后線性基因組可立即環(huán)化。

λ DNA有一個(gè)噬菌體結(jié)合位點(diǎn),可與細(xì)菌結(jié)合位點(diǎn)形成堿基配對(duì),細(xì)菌結(jié)合位點(diǎn)位于大腸桿菌染色體上半乳糖或gal操縱子和生物素操縱子之間。兩個(gè)位點(diǎn)配對(duì)后,整合酶在一種特異宿主蛋白的輔助下催化病毒和細(xì)菌DNA鏈和物理交換,環(huán)狀λ DNA以線性整合進(jìn)大腸桿菌DNA上毗鄰gal操縱子的位置,稱之為前噬菌體。

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