PRODUCT CLASSIFICATION
產(chǎn)品分類玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒適合檢測什么樣本?
上海信帆生物供應(yīng)玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒,產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定,現(xiàn)貨充足。
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)ELISA 檢測試劑盒說明書
【概要】
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone,ZEN)又稱F-2 毒素,是玉米赤霉菌的代謝產(chǎn)物,有雌激素樣作用,具有較強(qiáng)的生殖毒性致畸作用,可引起動(dòng)物發(fā)生雌激素亢進(jìn)癥,導(dǎo)致動(dòng)物不孕或流產(chǎn),對家禽、豬、牛和羊的影響較大,給畜牧業(yè)帶來很大經(jīng)濟(jì)損失。
【適用范圍】
本試劑盒可定性、定量檢測谷物及其加工制品和飼料中的
玉米赤霉烯酮。
【試驗(yàn)原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法,在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被玉米赤霉烯酮抗原,樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競爭結(jié)合抗玉米赤霉烯酮抗體(抗試劑),同時(shí)抗玉米赤霉烯酮抗體與酶標(biāo)二抗(酶標(biāo)物)相結(jié)合,經(jīng)TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含玉米赤霉烯酮的含量成負(fù)相關(guān),對照標(biāo)準(zhǔn)曲線,再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù),即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。
【試劑盒組成】
1. 96 孔板(8 孔*12 條)
2. ZEN 標(biāo)準(zhǔn)溶液×5 瓶:(1.5mL/瓶)
0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL
3. ZEN 酶標(biāo)物1 瓶.............. ....................................6mL
4. ZEN 抗試劑1 瓶....................................................6mL
5. 底物液1 瓶.............................................................6mL
6. 顯色液1 瓶.............................................................6mL
7. 終止液1 瓶.............................................................6mL
8. 濃縮洗滌液(20×) 1 瓶...............................20mL
9. 樣品稀釋液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL
10. 樣品稀釋液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL
11. 反應(yīng)板支架.............................................................1 塊
注:48 孔型號試劑盒內(nèi)容物數(shù)量、體積略有差別
【需要而未提供的設(shè)備及試劑】
設(shè)備:
┅┅酶標(biāo)儀450nm
┅┅振蕩器
┅┅粉碎機(jī)
┅┅離心機(jī)
┅┅天平:感量0.01g
┅┅微量移液器:單道20μL~200μL、100μL~1000μL
┅┅甲醇
┅┅去離子水
注:以上儀器均可代購
【試劑配制】
1. 洗滌工作液:將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進(jìn)行稀釋(1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水)。
2. 60%甲醇-水:取無水甲醇,用去離子水按6:4 體積比例稀釋(6 份無水甲醇+4 份水)。
【樣本前處理步驟】
一、小麥、大麥等谷物及其加工制品(稀釋倍數(shù):20)
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品,加入25.0mL60%甲醇-水;
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min;
3. 將濾液或上清液用去離子水以1:3 稀釋(例:1mL 濾液+3mL 去離子水),充分混勻后即為待測樣液;
4. 移取該樣液50uL 進(jìn)行檢測。
二、玉米粉、麥類、麩皮、豆粕等谷物類以及玉米蛋白粉、雞料等飼料(稀釋倍數(shù):60)
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品,加入25.0mL60%甲醇-水;
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min;
3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以1:11 稀釋(例:100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅰ),充分混勻后即為待測樣液;
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右,移取該液50uL進(jìn)行檢測。
三、DDGS、玉米皮等飼料原料及豬料、鴨料、牛料等飼料混
合料(稀釋倍數(shù):60)
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品,加入25.0mL60%甲醇-水;
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min;
3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅱ以1:11 稀釋(例:100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅱ),充分混勻后即為待測樣液;
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右,移取該液50uL 進(jìn)行檢測。
注意:若樣品中ZEN 偏高,建議將樣品提取液再進(jìn)一步稀釋后檢測。
【檢測步驟】
一、測定前須知:
1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫(20~25℃)。
2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。
3. ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致
性,正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點(diǎn)。
4. 在所有恒溫孵育過程中,避免光線照射,可用蓋板膜蓋
住微孔板。
二、操作步驟:
1. 將所需試劑及微孔板取出,放置室溫(20~25℃)30min
以上,液體試劑使用前均須搖勻。
2. 取出所需數(shù)量的微孔板,將不用的微孔板放回鋁箔袋中,
放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。
3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。
4. 將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔編號,建議每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗滌液,洗滌液不得溢出,放置40s左右,甩掉洗滌液,在吸水紙上拍干。
6. 分別加入標(biāo)準(zhǔn)溶液/待測樣液50μL 到對應(yīng)的微孔中,加入酶標(biāo)物50μL/孔,后再加入抗試劑50μL/孔,輕輕震蕩混勻,遮蓋后室溫(25℃)避光反應(yīng)20min。
7. 小心揭開蓋板,甩掉反應(yīng)液,加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次,每次間隔40s,用吸水紙拍干。
8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL,輕輕震蕩混勻,遮蓋后室溫(25℃)避光顯色15min。
9. 加入終止液50μL/孔,輕輕震蕩混勻,設(shè)酶標(biāo)儀于450nm處讀取每孔OD 值。
(若無酶標(biāo)儀,則不加終止用目測法可進(jìn)行判定)。
★注:該試劑盒佳反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)
致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。若環(huán)境溫度高于或低于
25℃,請適當(dāng)縮短或增加反應(yīng)及顯色時(shí)間。如有疑問,歡迎
垂詢。
【結(jié)果判定】
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
用酶標(biāo)儀測得每孔的光密度值(A),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過
準(zhǔn)曲線,可準(zhǔn)確定量樣品中ZEN 含量。
標(biāo)準(zhǔn)曲線:橫坐標(biāo)為ZEN 標(biāo)準(zhǔn)濃度的對數(shù),縱坐標(biāo)為百
分比(即各標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)品
孔光密度值(A0)再乘以100%所得, 光密度值(標(biāo)準(zhǔn)孔或樣品
孔) /光密度值(A0)×100%=%(縱坐標(biāo)))。相應(yīng)每個(gè)樣品的
ZEN 濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數(shù)據(jù)處理軟
件進(jìn)行計(jì)算。
備注:試劑盒初篩后,若出現(xiàn)陽性結(jié)果,建議用仲裁法進(jìn)一步
確證。
【注意事項(xiàng)】
1. 試劑及樣本沒有恢復(fù)到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)
的OD 值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)
曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)
立即進(jìn)行下一步操作。
3. 每種試劑使用前均需搖勻。
4. 反應(yīng)終止液為2M 硫酸,避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效期的試劑盒;也不要摻雜使用過了有
效期的試劑盒;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲(chǔ)存條件:試劑盒保存于2~8℃,不能冷凍,將不用的
微孔板重新真空密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的顯色劑對光敏
感,因此要避光保存。
7. 試劑變質(zhì)的跡象:顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質(zhì),
應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5
(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8. 對玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸鈉(10%,v/v)
溶液浸泡過夜。
9. 該試劑盒采用室溫反應(yīng)(20~25℃),當(dāng)反應(yīng)溫度高于
25℃或者低于20℃時(shí),均需相應(yīng)縮短或延長反應(yīng)時(shí)間,
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產(chǎn)品有效期為6 個(gè)月。生物試劑日期見包裝盒。
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