導讀：印第安納大學的生物化學家發(fā)現(xiàn)的新化合物，在用于影響乙型肝炎病毒共價閉合環(huán)狀DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）的生命周期中具有一定的應(yīng)用潛力，從而為乙肝治愈的研究帶來新希望。本文就此對乙肝治愈研究進行簡要分析。

1、cccDNA與乙肝

乙型肝炎病毒（HBV）的基因組（rcDNA）進入到細胞核后，rcDNA在病毒蛋白和宿主細胞因子的幫助下修復成共價閉合的松弛環(huán)狀雙鏈DNA（covalently closed circular DNA，cccDNA）。前基因組RNA（pgRNA）出核后，在胞質(zhì)中形成εpgRNA，并與病毒的聚合酶P蛋白共價結(jié)合，誘發(fā)核衣殼化。與多數(shù)其他的病毒DNA的機制不同，HBV cccDNA通過pgRNA的反轉(zhuǎn)錄進行復制，而cccDNA主要以微小染色體的形式存在于肝細胞內(nèi)，且其半衰期很長（33～100天），細胞核內(nèi)的zui長壽命可達14年。只要肝細胞中還存在，cccDNA乙肝病毒的復制就不會停止，并與病毒蛋白裝配成新的完整HBV，以芽生的方式再感染健康的肝細胞，而這是導致乙肝復發(fā)的根本原因。因此，盡管每個肝細胞內(nèi)只有約5～50個cccDNA拷貝，但是只要這些cccDNA池穩(wěn)定，就可以使得病毒的持續(xù)感染延續(xù)，因而清除肝細胞內(nèi)的cccDNA是乙肝*治愈所必需的。

目前，乙肝治療用藥（包括核苷類似物）的機制主要是通過抑制DNA多聚酶，降低外周血的DNA載量。然而，這些藥物大多只能在肝細胞的細胞漿中發(fā)揮作用，對于細胞核內(nèi)的cccDNA作用有限。也就是說，外周血中HBV DNA數(shù)量的明顯減少并不代表肝細胞內(nèi)的HBV DNA數(shù)量的同步降低，往往“治標不治本”。就目前而言，只有γ干擾素（干擾素分α、β、γ型，其中α-干擾素仍是目前DNA聚合酶抑制劑拉米夫定、阿德福韋、恩替卡韋、替比夫定、替諾福韋外的zui主要的慢性乙型肝炎療法，但是由于長期反應(yīng)效果差和較強的副作用而被禁止）能夠進入肝細胞核內(nèi)，抑制cccDNA的復制，并縮短cccDNA的半衰期。但是，目前γ干擾素在研究應(yīng)用中對于cccDNA的抑制效果尚不明確，而清除肝細胞核里面的cccDNA尚未有藥物能夠?qū)崿F(xiàn)，這構(gòu)成了乙肝治愈研究的瓶頸。

因而，現(xiàn)有藥物不能有效清除病毒cccDNA，而且一些藥物在停用后存在HBV DNA和轉(zhuǎn)氨酶水平的反彈，如果長期用藥又有可能導致病毒變異和耐藥性的產(chǎn)生，以致至今zui多只有3%～5%的乙肝可以治愈。

2、核心蛋白變構(gòu)調(diào)節(jié)劑（CpAMs）的研究

在印第安納大學的研究中，生物物理學的研究者發(fā)現(xiàn)了一些小分子核心蛋白變構(gòu)調(diào)節(jié)劑（CpAMs），可以選擇性且有效地降低病毒載量和病毒抗原。核心蛋白（病毒復制所需裝配的病毒核心顆粒，Cp）是涉及多個步驟、HBV生命周期中高度保守的病毒蛋白，CpAMs可改變HBV核心蛋白。

在此之前，研究得較多的化合物是異芳基—二氫嘧啶（heteroaryldihydropyrimidines HAPs），通過誤導正常核衣殼（HBV病毒吸附至細胞后，脫去包膜進入到肝細胞內(nèi)，并脫衣殼）的形成，來抑制病毒復制，從而使得核心蛋白水平下降。相對于核苷類似物的治療方案，利用HAP來抑制病毒衣殼蛋白的形成具有更好的穩(wěn)定性。

在目前的研究中，德國拜耳公司研究中心的兩種化合物Bay 38-7690和Bay 39-5493研究得較多，其中氚標記Bay 39-5493與HBV核心顆粒的結(jié)合后，對人乙肝病毒具有特異性、對應(yīng)選擇性和可逆性。Bay38-7690能夠阻止核心顆粒的產(chǎn)生，但不影響核心蛋白水平。

3、乙肝的基因治療

為了針對性地抑制，也有不少研究者將目標投向了基因治療和治療性疫苗的研究中。

其中，在基因治療方面，RNAi研究得較多，不少研究者致力于將該機制變成治療手段，也有不少實驗室研究成功的報道。但是，這些研究多基于體外的實驗展開，具體應(yīng)用至研究時，投遞到體內(nèi)靶細胞效率不高的問題幾乎是共性的問題：合成的SiRNA在肝細胞內(nèi)的存留時間短，而用質(zhì)粒表達的RNAi在體內(nèi)投遞的效率很低（僅能到達少部分肝細胞，這對于清除幾乎所有的肝細胞內(nèi)的HBV而言未達到預(yù)期），而AAV等載體可被宿主體內(nèi)抗體中和失效，或誘發(fā)可致命的宿主免疫反應(yīng)，存在引發(fā)腫瘤等風險。

4、激活機體的免疫應(yīng)答

目前，人類尚無有效且廣泛使用的方法，能夠打破免疫耐受，激活機體正常的對HBV的免疫應(yīng)答，從而在保護肝細胞的同時清除病毒使患者*。

至今，國內(nèi)外已經(jīng)開展了較多治療性疫苗研究，包括蛋白疫苗、核酸疫苗、T細胞表位肽疫苗等，但大多處于研究前研究或Ⅰ期、Ⅱ期研究研究階段。而且，從已獲得的效果來看，盡管一些研究過的治療性疫苗能夠誘導機體的免疫反應(yīng)，但是其在血清學改變和病毒抑制的效果上仍然不穩(wěn)定，因此盡管重慶啤酒、白云山、華麗家族和深圳康泰等的研發(fā)都在進行，但至今尚無有效的治療性疫苗上市。實現(xiàn)清除cccDNA、打破免疫耐受的道路仍然任重道遠。